小麦黄矮病是由大麦黄矮病毒引起的，是影响世界小麦生产的最重要的病毒病害。在病 害的综合防治研究中必须解决两个问题：一是提高测报的准确性，二是导入外源抗性基因或人工构建抗性基因。而DNA技术的建立是解决这两个问题的关键。因为测报的准确与否和外源抗性基因的导入与否，都需要一项快速、高灵敏的检测技术，植物对病毒抗性基因的构建也：要以cDNA技术为基础。
本项研究以我国大麦黄矮病毒独特的GPV株系的核糖核酸(RNA)为模板，采用以小 牛胸腺DNA片段为随机引物(结合的cDNA片段在整个核酸基因组中分布范围较广)，在dNTP和反转录酶的作用下，成功地合成了我国大麦黄矮病毒的 cDNA。然后采用加装人工接头的方法将双链，DNA插入质粒载体中，重组质粒在大肠杆菌中进行克隆，筛选出真正大麦黄矮病毒15个克隆(包括黄矮病毒专化系，黄矮病毒GPV株系专化系和黄矮病毒组专 化系的克隆系)。cDNA的插入长度在300～1600bp之间。用克隆的质粒DNA制备分子探针检测同源病毒的灵敏度可达100pg(10—10g)。利用32p同位素标记探针更安全、稳定、方便、经济。
本项研究主要应用于二个方面：第一由于检测灵敏度高，将来可用于检测单头蚜虫带毒率，以提高测报准确性；第二由于小麦种内没有抗黄矮病毒的基因，没有真正的抗病品种。因此利用病毒的卫星RNA和蛋白质外壳基因构建抗病的工程植株是一条很重要的途径。而蛋白质外壳基因片段的克隆，是建立在病毒核酸序列分析的基础上，而序列分析必须cD- NA为基础，同时利用卫星RNA的cDNA。因此大麦黄矮病毒cDNA的制备，将为开展构建抗黄矮病毒的基因工程植株创造良好的基础。
新闻来源：http://www.cast.net.cn/kj/cgtj/120920.shtml
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